Şam nematodu, şam meşəsi ekosistemlərində ciddi iqtisadi itkilərə səbəb olduğu bilinən karantin miqrasiya edən endoparazitdir. Bu tədqiqatda şam nematodlarına qarşı halogenləşdirilmiş indolların nematisidal fəaliyyəti və onların təsir mexanizmi nəzərdən keçirilir. Şam nematodlarına qarşı 5-iyodoindol və avermektinin (müsbət nəzarət) nematisidal fəaliyyəti aşağı konsentrasiyalarda (10 μg/mL) oxşar və yüksək olmuşdur. 5-iyodoindol məhsuldarlığı, reproduktiv aktivliyi, embrion və sürfə ölümünü və hərəkətli davranışı azaldır. Liqandların onurğasızlara xas olan qlutamat-qapılı xlorid kanal reseptorları ilə molekulyar qarşılıqlı əlaqəsi, avermektin kimi 5-iyodoindolun reseptorun aktiv sahəsinə sıx bağlanması fikrini dəstəkləyir. 5-Yodoindol həmçinin nematodlarda müxtəlif fenotipik deformasiyalara, o cümlədən anormal orqan çökməsi/büzülməsi və vakuolizasiyanın artmasına səbəb oldu. Bu nəticələr vakuolların nematodların metilasiyası ilə əlaqəli ölümündə rol oynaya biləcəyini göstərir. Əsas odur ki, 5-iyodoindol hər iki bitki növü (kələm və turp) üçün zəhərli deyildi. Beləliklə, bu tədqiqat göstərir ki, ekoloji şəraitdə yodoindol tətbiqi şam ağacının zədələnməsinə nəzarət edə bilər.
Şam ağacı nematodu (Bursaphelenchus xylophilus) şam meşəsi ekosistemlərinə ciddi ekoloji ziyan vurduğu bilinən köçəri endoparazitar nematodlar olan şam ağacı nematodlarına (PWN) aiddir1. Şam ağacı nematodunun törətdiyi şam solğunluğu xəstəliyi (PWD) bir sıra qitələrdə, o cümlədən Asiya və Avropada ciddi problemə çevrilir və Şimali Amerikada nematod introduksiya edilmiş şam növlərini məhv edir1,2. Şam ağacının azalması böyük iqtisadi problemdir və onun qlobal yayılması perspektivi narahat edir3. Aşağıdakı şam növləri ən çox nematod tərəfindən hücuma məruz qalır: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii və Pinus radiata4. Şam nematodu infeksiyadan həftələr və ya aylar ərzində şam ağaclarını öldürə bilən ciddi bir xəstəlikdir. Bundan əlavə, şam nematodlarının yayılması müxtəlif ekosistemlərdə yaygındır, buna görə də davamlı infeksiya zəncirləri yaradılmışdır1.
Bursaphelenchus xylophilus Aphelenchoidea superfamiliyasına və 102.5 sinifinə aid karantin bitki-parazitar nematoddur. Nematod göbələklərlə qidalanır və şam ağaclarının ağac toxumalarında çoxalır, dörd müxtəlif sürfə mərhələsinə keçir: L1, L2, L3, L4 və yetkin fərd1,6. Qida çatışmazlığı şəraitində şam nematodu ixtisaslaşdırılmış sürfə mərhələsinə - dauerə keçir, onun vektorunu - şam qabığı böcəyini (Monochamus alternatus) parazitləşdirir və sağlam şam ağaclarına köçürülür. Sağlam sahiblərdə nematodlar bitki toxumaları vasitəsilə sürətlə miqrasiya edir və parenximatoz hüceyrələrlə qidalanır ki, bu da infeksiyadan sonra bir il ərzində bir sıra yüksək həssaslıq reaksiyalarına, şamın solmasına və ölümünə səbəb olur1,7,8.
Şam nematodları ilə bioloji mübarizə uzun müddətdir ki, 20-ci əsrə aid karantin tədbirləri ilə bir problemdir. Şam nematodlarına nəzarət etmək üçün mövcud strategiyalar, ilk növbədə, kimyəvi müalicələri, o cümlədən ağacın fumigasiyası və nematisitlərin ağac gövdələrinə implantasiyası daxildir. Ən çox istifadə edilən nematikidlər avermektinlər ailəsinə aid olan avermektin və avermektin benzoatdır. Bu bahalı kimyəvi maddələr bir çox nematod növlərinə qarşı yüksək effektivliyə malikdir və ekoloji cəhətdən təhlükəsiz sayılır9. Bununla belə, bu nematisidlərin təkrar istifadəsinin seleksiya təzyiqi yaratması gözlənilir ki, bu da demək olar ki, davamlı şam nematodlarının yaranmasına gətirib çıxaracaq, belə ki, Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella və nəmatodlar Trichostrongylus colubriformis və Ostertagia-ya qarşı davamlı inkişaf etmiş bir neçə həşərat üçün nümayiş etdirilmişdir. avermektinlər10,11,12. Buna görə də, PVD-yə nəzarət etmək üçün alternativ, qənaətcil və ekoloji cəhətdən təmiz tədbirlər tapmaq üçün müqavimət nümunələri mütəmadi olaraq öyrənilməli və nematisidlər davamlı olaraq yoxlanılmalıdır. Son onilliklərdə bir sıra müəlliflər nematodlara qarşı mübarizə agentləri kimi bitki ekstraktlarının, efir yağlarının və uçucu maddələrin istifadəsini təklif etmişlər13,14,15,16.
Biz bu yaxınlarda Caenorhabditis elegans 17-də hüceyrələrarası və krallıqlararası siqnal molekulu olan indolun nematisidal fəaliyyətini nümayiş etdirdik. İndol mikrob ekologiyasında geniş yayılmış hüceyrədaxili siqnaldır, mikrob fiziologiyasına, spor əmələ gəlməsinə, plazmid sabitliyinə, dərmanlara qarşı müqavimətə, biofilmin əmələ gəlməsinə və virulentliyə təsir edən çoxsaylı funksiyaları idarə edir 18, 19. İndol və onun törəmələrinin digər patogen nematodlara qarşı fəaliyyəti öyrənilməmişdir. Bu tədqiqatda biz 34 indolun şam nematodlarına qarşı nematisidal fəaliyyətini araşdırdıq və mikroskopiya, time-lapse fotoqrafiya və molekulyar dok təcrübələrindən istifadə edərək ən güclü 5-iyodoindolun təsir mexanizmini aydınlaşdırdıq və toxumların cücərmə analizindən istifadə edərək onun bitkilərə zəhərli təsirlərini qiymətləndirdik.
İndolun yüksək konsentrasiyalarının (>1,0 mM) nematodlara nematisidal təsir göstərdiyi əvvəllər bildirilmişdir17. B. xylophilus (qarışıq həyat mərhələləri) indol və ya 33 müxtəlif indol törəmələri ilə 1 mM-də müalicə edildikdən sonra B. xylophilus-un ölümü nəzarət və müalicə olunan qruplarda canlı və ölü nematodların sayılması ilə ölçüldü. Beş indol əhəmiyyətli nematisidal aktivlik nümayiş etdirdi; müalicə olunmamış nəzarət qrupunun sağ qalması 24 saatdan sonra 95 ± 7% təşkil etmişdir. Test edilmiş 34 indoldan 1 mM-də 5-iyodoindol və 4-fluoroindol 100%, 5,6-diftorindiqo, metilindol-7-karboksilat və 7-iyodoindol isə təxminən 50% ölümə səbəb olmuşdur (Cədvəl 1).
5-iyodoindolun vakuol əmələ gəlməsinə və şam ağacı nematodunun metabolizminə təsiri. (A) Avermektin və 5-iyodoindolun yetkin erkək nematodlara təsiri, (B) L1 mərhələ nematod yumurtaları və (C) B. xylophilusun metabolizmi, (i) vakuollar 0 saatda müşahidə edilməmişdir, müalicə (ii) vakuollarla, (iii) vakuolların yığılması, (iii) vakuolların yığılması, (iii) vakuolların yığılması, (ii) vakuolların birləşməsi və (vi) nəhəng vakuolların əmələ gəlməsi. Qırmızı oxlar vakuolların şişməsini, mavi oxlar vakuolların birləşməsini və qara oxlar nəhəng vakuolları göstərir. Ölçək çubuğu = 50 μm.
Bundan əlavə, bu işdə şam nematodlarında metan səbəb olduğu ardıcıl ölüm prosesi də təsvir edilmişdir (Şəkil 4C). Metanogen ölüm görkəmli sitoplazmik vakuolların yığılması ilə əlaqəli apoptotik olmayan hüceyrə ölüm növüdür27. Şam nematodlarında müşahidə edilən morfoloji qüsurların metanla törədilən ölüm mexanizmi ilə sıx bağlı olduğu görünür. Müxtəlif vaxtlarda mikroskopik müayinə 5-iyodoindolun (0,1 mM) təsirindən 20 saat sonra nəhəng vakuolların əmələ gəldiyini göstərdi. Mikroskopik vakuollar müalicədən 8 saat sonra müşahidə edildi və 12 saatdan sonra onların sayı artdı. 14 saatdan sonra bir neçə böyük vakuol müşahidə edildi. 12-16 saat müalicədən sonra bir neçə əridilmiş vakuol aydın göründü ki, bu da vakuol birləşməsinin metanogen ölüm mexanizminin əsasını təşkil etdiyini göstərir. 20 saatdan sonra soxulcan boyu bir neçə nəhəng vakuol tapıldı. Bu müşahidələr C. elegansda metuozun ilk hesabatını əks etdirir.
5-yodoindol ilə müalicə olunan qurdlarda vakuolların yığılması və qopması da müşahidə edildi (şək. 5), qurdların əyilməsi və ətraf mühitə vakuolların buraxılması bunu sübut etdi. Yumurta qabığının membranında da vakuolun pozulması müşahidə edildi, bu, normal olaraq yumurtadan çıxma zamanı L2 tərəfindən bütöv saxlanılır (Əlavə Şəkil S2). Bu müşahidələr mayenin yığılması və osmorequlyasiya çatışmazlığının, eləcə də geri dönən hüceyrə zədələnməsinin (RCI) vakuolun formalaşması və yiringlənməsi prosesində iştirakını dəstəkləyir (Şəkil 5).
Müşahidə olunan vakuol əmələ gəlməsində yodun rolunu fərz edərək, biz natrium yodidin (NaI) və kalium yodidin (KI) nematisidal fəaliyyətini araşdırdıq. Bununla belə, konsentrasiyalarda (0,1, 0,5 və ya 1 mM) onlar nə nematodların sağ qalmasına, nə də vakuol əmələ gəlməsinə təsir göstərməmişlər (Əlavə Şəkil S5), baxmayaraq ki, 1 mM KI bir qədər nematisidal təsir göstərmişdir. Digər tərəfdən, 7-iodoindol (1 və ya 2 mM), 5-iyodoindol kimi, çoxsaylı vakuolları və struktur deformasiyaları əmələ gətirir (Əlavə Şəkil S6). İki yodoindol şam nematodlarında oxşar fenotipik xüsusiyyətlər göstərdi, NaI və KI isə yox idi. Maraqlıdır ki, indol sınaqdan keçirilmiş konsentrasiyalarda B. xylophilusda vakuol əmələ gəlməsinə səbəb olmayıb (məlumatlar göstərilməyib). Beləliklə, nəticələr indol-yod kompleksinin B. xylophilus-un vakuolizasiyasına və metabolizminə cavabdeh olduğunu təsdiqlədi.
Nematisidal aktivlik üçün sınaqdan keçirilmiş indollar arasında 5-iyodoindol ən yüksək sürüşmə indeksinə -5,89 kkal/mol, ardınca 7-iyodoindol (-4,48 kkal/mol), 4-fluoroindol (-4,33) və indol (-4,03) olmuşdur (Şəkil 6). 5-iyodoindolun lösin 218 ilə güclü onurğa hidrogen bağı onun bağlanmasını stabilləşdirir, halbuki bütün digər indol törəmələri yan zəncir hidrogen bağları vasitəsilə serin 260 ilə bağlanır. Digər modelləşdirilmiş yodoindollar arasında 2-iyodoindolun bağlanma dəyəri -5,248 kkal/mol təşkil edir ki, bu da lösin 218 ilə əsas hidrogen bağına bağlıdır. Digər məlum bağlamalara 3-iyodoindol (-4,3 kkal/mol), 4-iyodoindol (-4,0 kkal/mol) və (-4,0 kkal/mol-f) daxildir. kkal/mol) (Əlavə Şəkil S8). 5-iyodoindol və 2-iyodoindol istisna olmaqla, əksər halogenləşdirilmiş indollar və indolun özü, serin 260 ilə əlaqə yaradır. Leysin 218 ilə hidrogen bağlanmasının ivermektin üçün müşahidə edildiyi kimi effektiv reseptor-liqand bağlanmasının göstəricisidir (Əlavə Şəkil 57) və bunu təsdiqləyir. 2-iyodoindol, ivermektin kimi, lösin 218 vasitəsilə GluCL reseptorunun aktiv yerinə sıx şəkildə bağlanır (Şəkil 6 və Əlavə Şəkil S8). Biz təklif edirik ki, bu bağlama GluCL kompleksinin açıq məsamə strukturunu saxlamaq üçün tələb olunur və GluCL reseptorunun aktiv sahəsinə, 5-iyodoindol, 2-iyodoindol, avermektin və ivermektinə sıx bağlanaraq, beləliklə, ion kanalını açıq saxlayır və mayenin udulmasına imkan verir.
İndol və halogenləşdirilmiş indolun GluCL-ə molekulyar birləşməsi. (A) indol, (B) 4-fluoroindol, (C) 7-iyodoindol və (D) 5-iyodoindol liqandlarının GluCL-in aktiv yerinə bağlanma istiqamətləri. Zülal bir lentlə təmsil olunur və onurğa hidrogen bağları sarı nöqtəli xətlərlə göstərilir. (A'), (B'), (C') və (D') uyğun liqandların ətrafdakı amin turşusu qalıqları ilə qarşılıqlı təsirini göstərir və yan zəncirli hidrogen bağları çəhrayı nöqtəli oxlarla göstərilir.
Kələm və turp toxumlarının cücərməsinə 5-iyodoindolun toksik təsirini qiymətləndirmək üçün təcrübələr aparılmışdır. 5-iyodoindol (0,05 və ya 0,1 mM) və ya avermektin (10 μg/mL) ilkin cücərmə və bitkilərin əmələ gəlməsinə az və ya heç bir təsir göstərməmişdir (Şəkil 7). Bundan əlavə, müalicə olunmamış nəzarət növləri ilə 5-iyodoindol və ya avermektinlə müalicə olunan toxumların cücərmə sürəti arasında əhəmiyyətli fərq aşkar edilməmişdir. 5-iyodoindolun 1 mM (onun aktiv konsentrasiyasından 10 dəfə) yan köklərin inkişafını bir qədər gecikdirsə də, kök köklərinin uzanmasına və əmələ gələn yanal köklərin sayına təsiri əhəmiyyətsiz olmuşdur. Bu nəticələr göstərir ki, 5-iyodoindol bitki hüceyrələri üçün toksik deyil və tədqiq edilmiş konsentrasiyalarda bitki inkişaf proseslərinə mane olmur.
5-iyodoindolun toxumun cücərməsinə təsiri. B. oleracea və R. raphanistrum toxumlarının avermektinli və ya 5-iyodoindollu və ya olmayan Murashige və Skoog agar mühitində cücərməsi, cücərməsi və yan köklənməsi. Cücərmə 22°C-də 3 günlük inkubasiyadan sonra qeydə alınıb.
Bu tədqiqat indollar tərəfindən nematodların öldürülməsinin bir neçə halını bildirir. Vacib odur ki, bu, şam iynələrində yodoindolun metilasiyaya səbəb olması (kiçik vakuolların tədricən nəhəng vakuollara birləşərək, nəticədə membranın qırılması və ölümünə səbəb olan toplanması nəticəsində yaranan proses) və yodoindolun kommersiya nematik nematikidinklərinə bənzər əhəmiyyətli nematisidal xassələrə malik olması haqqında ilk hesabatdır.
Əvvəllər indolların prokaryotlarda və eukaryotlarda biofilmin inhibəsi/formasiyası, bakterial sağ qalma və patogenlik daxil olmaqla bir çox siqnal funksiyası yerinə yetirdiyi bildirilmişdir19,32,33,34. Bu yaxınlarda halogenləşdirilmiş indolların, indol alkaloidlərinin və yarımsintetik indol törəmələrinin potensial terapevtik təsirləri geniş tədqiqat marağına səbəb olmuşdur35,36,37. Məsələn, halogenləşdirilmiş indolların davamlı Escherichia coli və Staphylococcus aureus hüceyrələrini öldürdüyü göstərilmişdir37. Bundan əlavə, halogenləşdirilmiş indolların digər növlərə, cinslərə və krallıqlara qarşı effektivliyini öyrənmək elmi maraq kəsb edir və bu tədqiqat bu məqsədə çatmaq üçün bir addımdır.
Burada biz C. elegans-da geri çevrilən hüceyrə zədələnməsi (RCI) və metilasiya (Şəkil 4C və 5) əsasında 5-iyodoindolun səbəb olduğu ölümcüllük mexanizmini təklif edirik. Şişkinlik və vakuolyar degenerasiya kimi ödemli dəyişikliklər sitoplazmada nəhəng vakuollar şəklində özünü göstərən RCI və metilasyonun göstəriciləridir48,49. RCI ATP istehsalını azaltmaqla, ATPase nasosunun sıradan çıxmasına səbəb olmaqla və ya hüceyrə membranlarını pozaraq və Na+, Ca2+ və suyun sürətli axınına səbəb olmaqla enerji istehsalına müdaxilə edir50,51,52. Heyvan hüceyrələrində Ca2+ və suyun axması nəticəsində sitoplazmada mayenin yığılması nəticəsində intrasitoplazmik vakuollar yaranır53. Maraqlıdır ki, zədələnmə müvəqqəti olarsa və hüceyrələr müəyyən müddət ərzində ATP istehsal etməyə başlayarsa, hüceyrə zədələnməsinin bu mexanizmi geri qaytarıla bilər, lakin zədələnmə davam edərsə və ya pisləşərsə, hüceyrələr ölür.54 Müşahidələrimiz göstərir ki, 5-iyodoindol ilə müalicə olunan nematodlar stress şəraitinə məruz qaldıqdan sonra normal biosintezi bərpa edə bilmirlər.
B. xylophilus-da 5-iyodoindolun yaratdığı metilləşmə fenotipi yodun olması və onun molekulyar paylanması ilə bağlı ola bilər, çünki 7-iyodoindol B. xylophilus üzərində 5-iyodoindoldan daha az inhibitor təsir göstərmişdir (Cədvəl 1 və Əlavə Şəkil S6). Bu nəticələr Malta və başqalarının tədqiqatlarına qismən uyğundur. (2014), indoldakı piridil azot hissəsinin para-mövqedən meta-mövqeyə köçürülməsinin U251 hüceyrələrində vakuolizasiyanı, böyümənin ləngiməsini və sitotoksikliyi ləğv etdiyini bildirərək, molekulun zülaldakı xüsusi aktiv sahə ilə qarşılıqlı təsirinin kritik olduğunu irəli sürdü27,44,45. Bu tədqiqatda müşahidə edilən indol və ya halogenləşdirilmiş indollar və GluCL reseptorları arasındakı qarşılıqlı təsirlər də bu anlayışı dəstəkləyir, çünki 5 və 2-yodoindolun GluCL reseptorlarına tədqiq edilən digər indollara nisbətən daha güclü bağlandığı aşkar edilmişdir (Şəkil 6 və Əlavə Şəkil S8). İndolun ikinci və ya beşinci mövqeyində olan yodun onurğa hidrogen bağları vasitəsilə GluCL reseptorunun lösin 218-ə bağlandığı, digər halogenləşdirilmiş indolların və indolun isə serin 260 ilə zəif yan zəncirli hidrogen bağları meydana gətirdiyi aşkar edilmişdir (Şəkil 6). Buna görə də biz hesab edirik ki, halogenin lokalizasiyası vakuolyar degenerasiyanın induksiyasında mühüm rol oynayır, halbuki 5-iyodoindolun sıx bağlanması ion kanalını açıq saxlayır və bununla da sürətli maye axınına və vakuolun qırılmasına imkan verir. Bununla belə, 5-iyodoindolun təfərrüatlı təsir mexanizmi müəyyən edilməmişdir.
5-iyodoindolun praktik tətbiqindən əvvəl onun bitkilərə toksiki təsiri təhlil edilməlidir. Toxum cücərmə təcrübələrimiz göstərdi ki, tədqiq olunan konsentrasiyalarda 5-iyodoindolun toxumun cücərməsinə və ya sonrakı inkişaf proseslərinə heç bir mənfi təsiri yoxdur (Şəkil 7). Beləliklə, bu tədqiqat şam nematodlarının şam ağaclarına zərərliliyinə nəzarət etmək üçün ekoloji mühitdə 5-iyodoindolun istifadəsinə əsas verir.
Əvvəlki hesabatlar indol əsaslı terapiyanın antibiotik müqaviməti və xərçəngin inkişafı problemini həll etmək üçün potensial bir yanaşma olduğunu nümayiş etdirdi55. Bundan əlavə, indollar antibakterial, antikanser, antioksidant, antiinflamatuar, antidiyabetik, antiviral, antiproliferativ və vərəm əleyhinə fəaliyyətlərə malikdir və dərmanların inkişafı üçün perspektivli əsas ola bilər56,57. Bu tədqiqat ilk dəfə yodun antiparazitar və anthelmintic agent kimi potensial istifadəsini təklif edir.
Avermektin üç onillik əvvəl kəşf edilmiş və 2015-ci ildə Nobel Mükafatını qazanmışdır və onun antihelmintik kimi istifadəsi hələ də fəal şəkildə davam edir. Bununla belə, nematodlarda və həşərat zərərvericilərində avermektinlərə qarşı müqavimətin sürətli inkişafı səbəbindən şam ağaclarında PWN infeksiyasına qarşı mübarizə aparmaq üçün alternativ, ucuz və ekoloji cəhətdən təmiz strategiya lazımdır. Bu tədqiqat həmçinin 5-iyodoindolun şam nematodlarını öldürməsi mexanizmini və 5-iyodoindolun bitki hüceyrələri üçün aşağı toksikliyinə malik olduğunu bildirir ki, bu da onun gələcək kommersiya tətbiqi üçün yaxşı perspektivlər açır.
Bütün təcrübələr Yeungnam Universitetinin Etika Komitəsi, Gyeongsan, Koreya tərəfindən təsdiqləndi və üsullar Yeungnam Universitetinin Etika Komitəsinin təlimatlarına uyğun olaraq həyata keçirildi.
Yumurtanın inkubasiyası təcrübələri müəyyən edilmiş prosedurlardan istifadə edilərək aparılmışdır43. Yumurtadan çıxma sürətini (HR) qiymətləndirmək üçün 1 günlük yetkin nematodlar (təxminən 100 dişi və 100 erkək) göbələk olan Petri qablarına köçürüldü və 24 saat ərzində böyüməsinə icazə verildi. Yumurtalar daha sonra təcrid olundu və steril distillə edilmiş suda suspenziya kimi 5-iyodoindol (0,05 mM və 0,1 mM) və ya avermektin (10 μg/ml) ilə müalicə olundu. Bu suspenziyalar (500 μl; təxminən 100 yumurta) 24 quyudan ibarət toxuma mədəniyyəti boşqabının quyularına köçürüldü və 22 °C-də inkubasiya edildi. L2 sayları 24 saat inkubasiyadan sonra aparıldı, lakin incə platin tel ilə stimullaşdırıldıqda hüceyrələr hərəkət etmədikdə ölü hesab edildi. Bu təcrübə hər biri altı təkrar olmaqla iki mərhələdə aparılmışdır. Hər iki təcrübədən alınan məlumatlar birləşdirildi və təqdim edildi. HR faizi aşağıdakı kimi hesablanır:
Sürfələrin ölümü əvvəllər hazırlanmış prosedurlardan istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir. Nematod yumurtaları toplandı və embrionlar L2 mərhələ sürfələri yaratmaq üçün steril distillə edilmiş suda lyukdan çıxarmaqla sinxronlaşdırıldı. Sinxronlaşdırılmış sürfələr (təxminən 500 nematod) 5-iyodoindol (0,05 mM və 0,1 mM) və ya avermektin (10 mkq/ml) ilə müalicə olunub və B. cinerea Petri lövhələrində yetişdirilib. 22 °C-də 48 saat inkubasiyadan sonra nematodlar steril distillə edilmiş suda toplandı və L2, L3 və L4 mərhələlərinin olub-olmaması araşdırıldı. L3 və L4 mərhələlərinin olması sürfə transformasiyasını, L2 mərhələsinin olması isə transformasiyanın olmadığını göstərir. Şəkillər iRiS™ Rəqəmsal Hüceyrə Təsviri Sistemindən istifadə etməklə əldə edilib. Bu təcrübə hər biri altı təkrar olmaqla iki mərhələdə aparılmışdır. Hər iki təcrübədən alınan məlumatlar birləşdirildi və təqdim edildi.
5-iyodoindol və avermektinin toxumlar üçün toksikliyi Murashige və Skoog agar lövhələrində cücərmə testlərindən istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir.62 B. oleracea və R. raphanistrum toxumları əvvəlcə steril distillə edilmiş suda bir gün isladılmış, 1 ml 100% kommersiya etanol ilə yuyulmuş, 1 ml 100% kommersiya etanol ilə yuyulmuş, beləliklə, 1 ml 5% sterilizasiya edilmiş hipoklorit) 15 dəqiqə, və 1 ml steril su ilə beş dəfə yuyulur. Sterilləşdirilmiş toxumlar daha sonra tərkibində 0,86 q/l (0,2X) Murashige və Skoog mühiti və 0,7% bakterioloji aqar olan və ya 5-iyodoindol və ya avermektin olan və ya olmayan cücərmə agar boşqablarına sıxıldı. Sonra plitələr 22 °C-də inkubasiya edildi və 3 günlük inkubasiyadan sonra şəkillər çəkildi. Bu təcrübə hər birində altı təkrardan ibarət iki mərhələdə aparılmışdır.
Göndərmə vaxtı: 26 fevral 2025-ci il