Şam nematodları şam meşəsi ekosistemlərində ciddi iqtisadi itkilərə səbəb olduğu bilinən karantin miqrasiya edən endoparazitdir. Bu tədqiqat halogenləşdirilmiş indolların şam nematodlarına qarşı nematod fəaliyyətini və onların təsir mexanizmini nəzərdən keçirir. 5-yodoindol və avermektinin (müsbət nəzarət) şam nematodlarına qarşı nematod fəaliyyəti oxşar və aşağı konsentrasiyalarda (10 μq/ml) yüksək idi. 5-yodoindol məhsuldarlığı, reproduktiv fəaliyyəti, embrional və sürfə ölümünü və hərəkət davranışını azaltdı. Ligandların onurğasızlara xas qlutamatla örtülü xlorid kanal reseptorları ilə molekulyar qarşılıqlı təsirləri, avermektin kimi 5-yodoindolun reseptorun aktiv mərkəzinə möhkəm bağlandığı fikrini dəstəkləyir. 5-yodoindol həmçinin nematodlarda müxtəlif fenotipik deformasiyalara, o cümlədən anormal orqan çökməsi/büzülməsi və artan vakuolizasiyaya səbəb oldu. Bu nəticələr vakuolların nematod metilasiyası vasitəçiliyi ilə ölümdə rol oynaya biləcəyini göstərir. Əhəmiyyətli olan odur ki, 5-yodoindol hər iki bitki növü (kələm və turp) üçün zəhərli deyildi. Beləliklə, bu tədqiqat göstərir ki, ətraf mühit şəraitində yodoindolun tətbiqi şam ağaclarının solmasının qarşısını ala bilər.
Şam ağacı nematodları (Bursaphelenchus xylophilus) şam ağacı nematodlarına (PWN) aiddir, şam meşəsi ekosistemlərinə ciddi ekoloji ziyan vurduğu bilinən köçəri endoparazit nematodlardır1. Şam ağacı nematodunun yaratdığı şam solğunluğu xəstəliyi (ŞSXX) Asiya və Avropa da daxil olmaqla bir neçə qitədə ciddi problemə çevrilir və Şimali Amerikada nematod gətirilmiş şam növlərini məhv edir1,2. Şam ağaclarının azalması böyük iqtisadi problemdir və onun qlobal yayılma perspektivi narahatedicidir3. Aşağıdakı şam növləri ən çox nematod tərəfindən hücuma məruz qalır: Pinus densiflora, Pinus sylvestris, Pinus thunbergii, Pinus koraiensis, Pinus thunbergii, Pinus thunbergii və Pinus radiata4. Şam nematodları infeksiyadan sonra həftələr və ya aylar ərzində şam ağaclarını öldürə biləcək ciddi bir xəstəlikdir. Bundan əlavə, şam nematodlarının yayılması müxtəlif ekosistemlərdə yaygındır, buna görə də davamlı infeksiya zəncirləri yaradılmışdır1.
Burphalenchus xylophilus, Aphelenchoidea superfəsiləsinə və 102.5-ci dəstəyə aid karantin bitki-parazit nematoddur. Nematod göbələklərlə qidalanır və şam ağaclarının ağac toxumalarında çoxalaraq dörd fərqli sürfə mərhələsinə keçir: L1, L2, L3, L4 və yetkin fərd1,6. Qida çatışmazlığı şəraitində şam nematodunun ixtisaslaşmış sürfə mərhələsinə - dauerə keçir, bu mərhələ öz vektoru olan şam qabığı böcəyini (Monochamus alternatus) parazitləşdirir və sağlam şam ağaclarına keçir. Sağlam sahiblərdə nematodlar tez bir zamanda bitki toxumalarından keçir və parenximatoz hüceyrələrlə qidalanır ki, bu da infeksiyadan bir il sonra bir sıra hiperhəssaslıq reaksiyalarına, şamın solmasına və ölümünə səbəb olur1,7,8.
Şam nematodlarının bioloji mübarizəsi uzun müddətdir ki, çətinlik yaradır və karantin tədbirləri 20-ci əsrə gedib çıxır. Şam nematodlarına qarşı mübarizənin hazırkı strategiyaları əsasən ağacın fumiqasiyası və ağac gövdələrinə nematosidlərin implantasiyası da daxil olmaqla kimyəvi müalicəni əhatə edir. Ən çox istifadə edilən nematosidlər avermektin ailəsinə aid olan avermektin və avermektin benzoatdır. Bu bahalı kimyəvi maddələr bir çox nematod növünə qarşı yüksək təsirlidir və ekoloji cəhətdən təhlükəsiz hesab olunur9. Lakin, bu nematosidlərin təkrar istifadəsi, demək olar ki, mütləq davamlı şam nematodlarının yaranmasına səbəb olacaq seleksiya təzyiqi yaratması gözlənilir, bu da tədricən avermektinlərə qarşı müqavimət inkişaf etdirən Leptinotarsa decemlineata, Plutella xylostella və Trichostrongylus colubriformis və Ostertagia circumcincta kimi bir neçə həşərat zərərvericisi üçün nümayiş etdirilib10,11,12. Buna görə də, PVD-ni idarə etmək üçün alternativ, səmərəli və ekoloji cəhətdən təmiz tədbirlər tapmaq məqsədilə müqavimət nümunələri müntəzəm olaraq öyrənilməli və nematosidlər davamlı olaraq yoxlanılmalıdır. Son onilliklərdə bir sıra müəlliflər nematod nəzarət agentləri kimi bitki ekstraktlarının, efir yağlarının və uçucu maddələrin istifadəsini təklif etmişlər13,14,15,16.
Bu yaxınlarda Caenorhabditis elegans 17-də hüceyrələrarası və krallıqlararası siqnal molekulu olan indolun nematisid aktivliyini nümayiş etdirdik. İndol mikrob ekologiyasında geniş yayılmış hüceyrədaxili siqnaldır və mikrob fiziologiyasına, spor əmələ gəlməsinə, plazmid stabilliyinə, dərman müqavimətinə, biofilm əmələ gəlməsinə və virulentliyə təsir edən çoxsaylı funksiyaları idarə edir 18, 19. İndol və onun törəmələrinin digər patogen nematodlara qarşı aktivliyi öyrənilməyib. Bu tədqiqatda 34 indolun şam nematodlarına qarşı nematisid aktivliyini araşdırdıq və ən güclü 5-yodoindolun təsir mexanizmini mikroskopiya, zaman fasiləsi fotoqrafiyası və molekulyar dok təcrübələrindən istifadə edərək aydınlaşdırdıq və toxum cücərmə analizindən istifadə edərək bitkilərə zəhərli təsirlərini qiymətləndirdik.
İndolun yüksək konsentrasiyalarının (>1.0 mM) nematodlara qarşı nematosid təsir göstərdiyi əvvəllər bildirilmişdir17. B. xylophilus (qarışıq həyat mərhələləri) indol və ya 1 mM-də 33 fərqli indol törəməsi ilə müalicə edildikdən sonra, B. xylophilus-un ölüm nisbəti nəzarət və müalicə qruplarında canlı və ölü nematodların sayılması ilə ölçülmüşdür. Beş indol əhəmiyyətli nematosid aktivliyi nümayiş etdirmişdir; müalicə olunmamış nəzarət qrupunun sağ qalma nisbəti 24 saatdan sonra 95 ± 7% təşkil etmişdir. Test edilmiş 34 indoldan 1 mM-də 5-yodoindol və 4-fluoroindol 100% ölümə səbəb olmuşdur, 5,6-difluoroindigo, metilindol-7-karboksilat və 7-yodoindol isə təxminən 50% ölümə səbəb olmuşdur (Cədvəl 1).
5-yodoindolun şam ağacı nematodunun vakuol əmələ gəlməsinə və metabolizmasına təsiri. (A) Avermektin və 5-yodoindolun yetkin erkək nematodlara təsiri, (B) L1 mərhələli nematod yumurtaları və (C) B. xylophilus-un metabolizması, (i) 0 saatda vakuollar müşahidə edilmədi, müalicə (ii) vakuollara, (iii) çoxlu vakuolların toplanmasına, (iv) vakuolların şişməsinə, (v) vakuolların birləşməsinə və (vi) nəhəng vakuolların əmələ gəlməsinə səbəb oldu. Qırmızı oxlar vakuolların şişməsini, mavi oxlar vakuolların birləşməsini, qara oxlar isə nəhəng vakuolları göstərir. Ölçü zolağı = 50 μm.
Bundan əlavə, bu tədqiqat həmçinin şam nematodlarında metanla əlaqəli ölümün ardıcıl prosesini təsvir etmişdir (Şəkil 4C). Metanogen ölüm, görkəmli sitoplazmatik vakuolların toplanması ilə əlaqəli qeyri-apoptotik hüceyrə ölümü növüdür27. Şam nematodlarında müşahidə edilən morfoloji qüsurlar metanla əlaqəli ölüm mexanizmi ilə sıx əlaqəli görünür. Müxtəlif vaxtlarda aparılan mikroskopik müayinə göstərdi ki, nəhəng vakuollar 5-iodoindol (0,1 mM) ilə 20 saatlıq təsirdən sonra əmələ gəlmişdir. Mikroskopik vakuollar 8 saatlıq müalicədən sonra müşahidə edildi və onların sayı 12 saatdan sonra artdı. 14 saatdan sonra bir neçə böyük vakuol müşahidə edildi. 12-16 saatlıq müalicədən sonra bir neçə əridilmiş vakuol aydın görünürdü ki, bu da vakuol birləşməsinin metanogen ölüm mexanizminin əsasını təşkil etdiyini göstərir. 20 saatdan sonra qurd boyunca bir neçə nəhəng vakuol tapıldı. Bu müşahidələr C. elegans-da metuozun ilk hesabatını təmsil edir.
5-yodoindol ilə müalicə olunmuş qurdlarda vakuolların aqreqasiyası və yırtılması da müşahidə edilmişdir (Şəkil 5), bunu qurdların əyilməsi və vakuolların ətraf mühitə buraxılması sübut edir. Yumurta qabığı membranında da vakuolların pozulması müşahidə edilmişdir ki, bu da normalda yumurtadan çıxma zamanı L2 tərəfindən bütöv saxlanılır (Əlavə Şəkil S2). Bu müşahidələr maye yığılmasının və osmorequlyasiya çatışmazlığının, eləcə də geri dönən hüceyrə zədələnməsinin (RCI) vakuol əmələ gəlməsi və irinləmə prosesində iştirakını dəstəkləyir (Şəkil 5).
Yodun müşahidə olunan vakuol əmələ gəlməsindəki rolunu fərz edərək, natrium yodidin (NaI) və kalium yodidin (KI) nematosid aktivliyini araşdırdıq. Lakin, konsentrasiyalarda (0,1, 0,5 və ya 1 mM), onlar nə nematodun sağ qalmasına, nə də vakuol əmələ gəlməsinə təsir göstərmədi (Əlavə Şəkil S5), baxmayaraq ki, 1 mM KI yüngül nematosid təsir göstərmişdir. Digər tərəfdən, 7-yodoindol (1 və ya 2 mM), 5-yodoindol kimi, çoxsaylı vakuollara və struktur deformasiyalara səbəb oldu (Əlavə Şəkil S6). İki yodoindol şam nematodlarında oxşar fenotipik xüsusiyyətlər göstərdi, NaI və KI isə göstərmədi. Maraqlıdır ki, indol sınaqdan keçirilmiş konsentrasiyalarda B. xylophilus-da vakuol əmələ gəlməsinə səbəb olmadı (məlumatlar göstərilməyib). Beləliklə, nəticələr indol-yod kompleksinin B. xylophilus-un vakuollaşması və metabolizmasından məsul olduğunu təsdiqlədi.
Nematisid aktivliyi üçün sınaqdan keçirilmiş indolların arasında 5-yodoindol ən yüksək sürüşmə indeksinə -5.89 kkal/mol, ardınca 7-yodoindol (-4.48 kkal/mol), 4-flüorindol (-4.33) və indol (-4.03) malik idi (Şəkil 6). 5-yodoindolun leysin 218 ilə güclü onurğa hidrogen rabitəsi onun bağlanmasını sabitləşdirir, digər bütün indol törəmələri isə yan zəncirli hidrogen rabitələri vasitəsilə serin 260 ilə bağlanır. Digər modelləşdirilmiş yodoindollarla yanaşı, 2-yodoindolun bağlanma dəyəri -5.248 kkal/mol təşkil edir ki, bu da onun lösin 218 ilə əsas hidrogen rabitəsi ilə əlaqədardır. Digər məlum bağlanmalara 3-yodoindol (-4.3 kkal/mol), 4-yodoindol (-4.0 kkal/mol) və 6-flüorindol (-2.6 kkal/mol) daxildir (Əlavə Şəkil S8). 5-yodoindol və 2-yodoindol istisna olmaqla, əksər halogenləşdirilmiş indol və indolun özü serin 260 ilə əlaqə əmələ gətirir. İvermektin üçün müşahidə edildiyi kimi (Əlavə Şəkil S7), leysin 218 ilə hidrogen rabitəsinin effektiv reseptor-liqand bağlanmasının göstəricisi olması, ivermektin kimi, 5-yodoindol və 2-yodoindolun da leysin 218 vasitəsilə GluCL reseptorunun aktiv sahəsinə möhkəm bağlandığını təsdiqləyir (Şəkil 6 və Əlavə Şəkil S8). Biz təklif edirik ki, bu bağlanma GluCL kompleksinin açıq məsamə strukturunu qorumaq üçün tələb olunur və GluCL reseptorunun aktiv sahəsinə möhkəm bağlanmaqla 5-yodoindol, 2-yodoindol, avermektin və ivermektin beləliklə ion kanalını açıq saxlayır və mayenin udulmasına imkan verir.
İndol və halogenləşdirilmiş indolun GluCL-ə molekulyar birləşməsi. (A) indol, (B) 4-fluoroindol, (C) 7-yodoindol və (D) 5-yodoindol ligandlarının GluCL-in aktiv mərkəzinə bağlanma istiqamətləri. Zülal lentlə təmsil olunur və onurğa hidrogen rabitələri sarı nöqtəli xətlər kimi göstərilir. (A′), (B′), (C′) və (D′) müvafiq ligandların ətrafdakı amin turşusu qalıqları ilə qarşılıqlı təsirini göstərir və yan zəncirli hidrogen rabitələri çəhrayı nöqtəli oxlarla göstərilir.
5-yodoindolun kələm və turp toxumlarının cücərməsinə zəhərli təsirini qiymətləndirmək üçün təcrübələr aparılmışdır. 5-yodoindol (0,05 və ya 0,1 mM) və ya avermektin (10 μq/ml) ilkin cücərməyə və bitkinin əmələ gəlməsinə az və ya heç bir təsir göstərməmişdir (Şəkil 7). Bundan əlavə, müalicə olunmamış nəzarət qrupunun cücərmə sürəti ilə 5-yodoindol və ya avermektinlə müalicə olunmuş toxumlar arasında heç bir əhəmiyyətli fərq aşkar edilməmişdir. 5-yodoindolun 1 mM (aktiv konsentrasiyasının 10 qatı) yan köklərin inkişafını bir qədər gecikdirsə də, kökün uzanmasına və əmələ gələn yan köklərin sayına təsiri əhəmiyyətsiz olmuşdur. Bu nəticələr göstərir ki, 5-yodoindol bitki hüceyrələri üçün zəhərli deyil və tədqiq olunan konsentrasiyalarda bitki inkişaf proseslərinə mane olmur.
5-yodoindolun toxum cücərməsinə təsiri. Avermektin və ya 5-yodoindol ilə və ya olmadan Murashige və Skoog agar mühitində B. oleracea və R. raphanistrum toxumlarının cücərməsi, cücərməsi və yan köklənməsi. Cücərmə 22°C-də 3 günlük inkubasiyadan sonra qeydə alınıb.
Bu tədqiqatda nematodların indollarla öldürülməsinin bir neçə halı qeydə alınıb. Əhəmiyyətli olan odur ki, bu, şam iynələrində yodoindolun metilləşməni (tədricən nəhəng vakuollara birləşən və nəticədə membranın yırtılmasına və ölümünə səbəb olan kiçik vakuolların toplanması nəticəsində yaranan bir proses) induksiya etməsi ilə bağlı ilk məlumatdır və yodoindol kommersiya nematosid avermektinin xüsusiyyətlərinə bənzər əhəmiyyətli nematosid xüsusiyyətləri nümayiş etdirir.
İndolların əvvəllər prokaryotlarda və ökaryotlarda biofilmin inhibisyonu/əmələ gəlməsi, bakteriyaların sağ qalması və patogenliyi daxil olmaqla bir çox siqnal funksiyası yerinə yetirdiyi bildirilmişdir19,32,33,34. Bu yaxınlarda halogenləşdirilmiş indolların, indol alkaloidlərinin və yarı sintetik indol törəmələrinin potensial terapevtik təsirləri geniş tədqiqat marağına səbəb olmuşdur35,36,37. Məsələn, halogenləşdirilmiş indolların davamlı Escherichia coli və Staphylococcus aureus hüceyrələrini öldürdüyü göstərilmişdir37. Bundan əlavə, halogenləşdirilmiş indolların digər növlərə, cinslərə və krallıqlara qarşı effektivliyini öyrənmək elmi maraq doğurur və bu tədqiqat bu məqsədə çatmaq üçün bir addımdır.
Burada, geri dönən hüceyrə zədələnməsi (RCI) və metilləşməyə əsaslanaraq C. elegans-da 5-yodoindolun yaratdığı ölümcüllük mexanizmini təklif edirik (Şəkil 4C və 5). Şişkinlik və vakuol degenerasiyası kimi ödemli dəyişikliklər sitoplazmada nəhəng vakuollar kimi özünü göstərən RCI və metilləşmənin göstəriciləridir48,49. RCI, ATF istehsalını azaltmaqla, ATFaz nasosunun sıradan çıxmasına səbəb olmaqla və ya hüceyrə membranlarını pozaraq Na+, Ca2+ və suyun sürətli axınına səbəb olmaqla enerji istehsalına mane olur50,51,52. Heyvan hüceyrələrində Ca2+ və suyun axını səbəbindən sitoplazmada maye yığılması nəticəsində sitoplazmadaxili vakuollar yaranır53. Maraqlıdır ki, hüceyrə zədələnməsinin bu mexanizmi, zədə müvəqqətidirsə və hüceyrələr müəyyən bir müddət ərzində ATF istehsal etməyə başlayırsa, geri çevrilə bilər, lakin zədə davam edərsə və ya pisləşərsə, hüceyrələr ölür.54 Müşahidələrimiz göstərir ki, 5-iodoindol ilə müalicə olunan nematodlar stress şəraitinə məruz qaldıqdan sonra normal biosintezi bərpa edə bilmirlər.
B. xylophilus-da 5-yodoindol tərəfindən induksiya edilən metilləşmə fenotipi yodun olması və onun molekulyar paylanması ilə əlaqəli ola bilər, çünki 7-yodoindol B. xylophilus-a 5-yodoindoldan daha az inhibitor təsir göstərmişdir (Cədvəl 1 və Əlavə Şəkil S6). Bu nəticələr qismən Maltese və digərlərinin (2014) tədqiqatları ilə uyğundur. Onlar indoldakı piridil azot hissəsinin para- mövqedən meta- mövqeyə translokasiyasının U251 hüceyrələrində vakuolizasiyanı, böyümə inhibisiyasını və sitotoksikliyi aradan qaldırdığını bildirmişlər ki, bu da molekulun zülaldakı spesifik aktiv sahə ilə qarşılıqlı təsirinin kritik olduğunu göstərir27,44,45. Bu tədqiqatda müşahidə edilən indol və ya halogenləşdirilmiş indollarla GluCL reseptorları arasındakı qarşılıqlı təsirlər də bu fikri dəstəkləyir, çünki 5- və 2-yodoindolun araşdırılan digər indollara nisbətən GluCL reseptorlarına daha güclü şəkildə bağlandığı aşkar edilmişdir (Şəkil 6 və Əlavə Şəkil S8). İndolun ikinci və ya beşinci mövqeyindəki yodun onurğa hidrogen rabitələri vasitəsilə GluCL reseptorunun leysin 218-ə bağlandığı, digər halogenləşdirilmiş indolların və indolun özü isə serin 260 ilə zəif yan zəncirli hidrogen rabitələri əmələ gətirdiyi aşkar edilmişdir (Şəkil 6). Buna görə də, halogenin lokalizasiyasının vakuol degenerasiyasının induksiyasında mühüm rol oynadığını, 5-yodoindolun sıx bağlanmasının isə ion kanalını açıq saxladığını və bununla da sürətli maye axınına və vakuolun partlamasına imkan verdiyini fərz edirik. Lakin, 5-yodoindolun ətraflı təsir mexanizmi hələ müəyyən edilməmişdir.
5-yodoindolun praktik tətbiqindən əvvəl onun bitkilərə zəhərli təsiri təhlil edilməlidir. Toxum cücərməsi ilə bağlı təcrübələrimiz göstərdi ki, 5-yodoindol tədqiq olunan konsentrasiyalarda toxum cücərməsinə və ya sonrakı inkişaf proseslərinə heç bir mənfi təsir göstərməyib (Şəkil 7). Beləliklə, bu tədqiqat şam ağacları üçün şam nematodlarının zərərliliyini nəzarətdə saxlamaq üçün ekoloji mühitdə 5-yodoindolun istifadəsi üçün əsas yaradır.
Əvvəlki hesabatlar göstərir ki, indol əsaslı terapiya antibiotik müqaviməti və xərçəngin inkişafı problemini həll etmək üçün potensial bir yanaşmadır55. Bundan əlavə, indolların antibakterial, xərçəng əleyhinə, antioksidant, iltihab əleyhinə, diabet əleyhinə, antiviral, antiproliferativ və vərəm əleyhinə təsirləri var və dərmanların hazırlanması üçün perspektivli əsas ola bilər56,57. Bu tədqiqat ilk dəfə olaraq yodun parazit əleyhinə və anthelmintic agent kimi potensial istifadəsini təklif edir.
Avermektin üç onillik əvvəl kəşf edilmiş və 2015-ci ildə Nobel mükafatına layiq görülmüşdür və onun anthelmintic kimi istifadəsi hələ də fəal şəkildə davam edir. Lakin, nematodlarda və zərərverici həşəratlarda avermektinlərə qarşı müqavimətin sürətli inkişafı səbəbindən şam ağaclarında PWN infeksiyasını nəzarətdə saxlamaq üçün alternativ, ucuz və ekoloji cəhətdən təmiz bir strategiyaya ehtiyac var. Bu tədqiqat həmçinin 5-yodoindolun şam nematodlarını necə öldürdüyü mexanizmini və 5-yodoindolun bitki hüceyrələri üçün aşağı toksikliyə malik olduğunu bildirir ki, bu da onun gələcək kommersiya tətbiqi üçün yaxşı perspektivlər açır.
Bütün təcrübələr Koreyanın Gyeongsan şəhərindəki Yeungnam Universitetinin Etika Komitəsi tərəfindən təsdiq edilmiş və metodlar Yeungnam Universitetinin Etika Komitəsinin təlimatlarına uyğun olaraq həyata keçirilmişdir.
Yumurta inkubasiya təcrübələri müəyyən edilmiş prosedurlardan istifadə etməklə aparılmışdır43. Yumurtadan çıxma sürətini (HR) qiymətləndirmək üçün 1 günlük yetkin nematodlar (təxminən 100 dişi və 100 erkək) göbələk olan Petri qablarına köçürüldü və 24 saat böyüməsinə icazə verildi. Daha sonra yumurtalar təcrid edildi və steril distillə edilmiş suda suspenziya kimi 5-iodoindol (0,05 mM və 0,1 mM) və ya avermektin (10 μq/ml) ilə müalicə edildi. Bu suspenziyalar (500 μl; təxminən 100 yumurta) 24 dəlikli toxuma kulturası lövhəsinin dəliklərinə köçürüldü və 22 °C-də inkubasiya edildi. L2 saymaları 24 saat inkubasiyadan sonra aparıldı, lakin incə platin məftil ilə stimullaşdırıldıqda hüceyrələr hərəkət etmədikdə ölü hesab edildi. Bu təcrübə hər biri altı təkrar olmaqla iki mərhələdə aparıldı. Hər iki təcrübədən əldə edilən məlumatlar birləşdirildi və təqdim edildi. HR faizi aşağıdakı kimi hesablanır:
Sürfə ölümü əvvəllər hazırlanmış prosedurlardan istifadə etməklə qiymətləndirilmişdir. Nematod yumurtaları toplanmış və embrionlar L2 mərhələli sürfələri yaratmaq üçün steril distillə edilmiş suda çıxmaqla sinxronlaşdırılmışdır. Sinxronlaşdırılmış sürfələr (təxminən 500 nematod) 5-iodoindol (0,05 mM və 0,1 mM) və ya avermektin (10 μq/ml) ilə müalicə olunmuş və B. cinerea Petri lövhələrində yetişdirilmişdir. 22 °C-də 48 saatlıq inkubasiyadan sonra nematodlar steril distillə edilmiş suda toplanmış və L2, L3 və L4 mərhələlərinin mövcudluğu yoxlanılmışdır. L3 və L4 mərhələlərinin olması sürfə transformasiyasını, L2 mərhələsinin olması isə transformasiya olmadığını göstərirdi. Şəkillər iRiS™ Rəqəmsal Hüceyrə Görüntüləmə Sistemi istifadə edilərək əldə edilmişdir. Bu təcrübə hər biri altı təkrar olmaqla iki mərhələdə aparılmışdır. Hər iki təcrübədən əldə edilən məlumatlar birləşdirilərək təqdim edilmişdir.
5-yodoindol və avermektinin toxumlara toksikliyi Murashige və Skoog aqar lövhələrində cücərmə testləri istifadə edilərək qiymətləndirilmişdir.62 B. oleracea və R. raphanistrum toxumları əvvəlcə bir gün steril distillə edilmiş suda isladılmış, 1 ml 100% etanol ilə yuyulmuş, 1 ml 50% kommersiya ağardıcısı (3% natrium hipoxlorit) ilə 15 dəqiqə sterilizasiya edilmiş və 1 ml steril su ilə beş dəfə yuyulmuşdur. Daha sonra sterilizasiya edilmiş toxumlar 0,86 q/l (0,2X) Murashige və Skoog mühiti və 0,7% bakterioloji aqar 5-yodoindol və ya avermektin ilə və ya onsuz olan cücərmə aqar lövhələrinə basılmışdır. Daha sonra lövhələr 22 °C-də inkubasiya edilmiş və 3 günlük inkubasiyadan sonra şəkillər çəkilmişdir. Bu təcrübə hər mərhələdə altı təkrar olmaqla iki mərhələdə aparılmışdır.
Yayımlanma vaxtı: 26 Fevral 2025