Bitki və patogen materialları
Sorghum konversiya populyasiyası (SCP) kimi tanınan sorghum assosiasiyasının xəritələşdirilməsi populyasiyasını İllinoys Universitetində (hazırda UC Davis-də) Dr. Pat Brown təqdim etmişdir. Bu, əvvəllər təsvir edilmişdir və ABŞ mühitində bitkilərin böyüməsini və inkişafını asanlaşdırmaq üçün fotoperioda həssaslığa və daha kiçik boyluğa çevrilmiş müxtəlif xətlərin toplusudur. Bu tədqiqatda bu populyasiyadan 510 xətt istifadə edilmişdir, baxmayaraq ki, zəif cücərmə və digər keyfiyyətə nəzarət problemləri səbəbindən bütün xətlər hər üç xüsusiyyətin təhlilində istifadə edilməmişdir. Nəticədə 345 xəttdən əldə edilən məlumatlar xitin reaksiyasının təhlili üçün, 472 xətt flg22 reaksiyası üçün və 456 xətt TLS müqaviməti üçün istifadə edilmişdir.B. cookeiLSLP18 ştammı Arkanzas Universitetində Dr. Burt Blumdan əldə edilmişdir.
MAMP cavab ölçməsi
Bu tədqiqatda iki fərqli MAMP flg22 (Genscript kataloqu # RP19986) və xitin istifadə edilmişdir. Sorghum bitkiləri istixanada torpaqla (33% Sunshine Redi-Earth Pro Growing Mix) doldurulmuş düzənliklərə qoyulmuş əlavələrdə yetişdirilmişdir. Yığım günündə yarpaqların əlavə nəmlənməsinin qarşısını almaq üçün bitkilər nümunə toplanmasından bir gün əvvəl suvarılmışdır.
Xətlər təsadüfi olaraq seçildi və logistik səbəblərə görə 60 xətdən ibarət qruplarda əkildi. Hər xət üçün hər xətdə iki toxum olmaqla üç "qab" əkildi. Bütün populyasiya qiymətləndirilənə qədər əvvəlki partiya emal edildikdən sonra sonrakı partiyalar əkildi. Hər iki MAMP üçün iki eksperimental sınaq keçirildi və hər iki mərhələdə genotiplər yenidən təsadüfi olaraq seçildi.
ROS analizləri əvvəllər təsvir edildiyi kimi aparılmışdır. Qısaca desək, hər xətt üçün 3 fərqli qabda altı toxum əkilmişdir. Yaranan fidanlardan üçü vahidliyə əsasən seçilmişdir. Qeyri-adi görünən və ya əksəriyyətindən xeyli hündür və ya qısa olan fidanlar istifadə edilməmişdir. Üç fərqli 15 günlük sorghum bitkisinin 4-cü yarpağının ən geniş hissəsindən diametri 3 mm olan dörd yarpaq diski çıxarılmışdır. Hər yarpaqda iki bitkidən bir disk və bir bitkidən iki disk götürülmüş, ikinci disk isə su nəzarəti olmuşdur (aşağıya baxın). Disklər ayrı-ayrılıqda qara 96 dəlikli boşqabda 50 µl H2O üzərində üzmüş, işığa məruz qalmamaq üçün alüminium möhürlə möhürlənmiş və gecə otaq temperaturunda saxlanılmışdır. Növbəti səhər 2 mq/ml xemilüminesans zondu L-012 (Wako, kataloq # 120-04891), 2 mq/ml xren peroksidaza (VI-A tipi, Sigma-Aldrich, kataloq # P6782) və 100 mq/ml Xitin və ya 2 μM Flg22 istifadə edərək reaksiya məhlulu hazırlanmışdır. Bu reaksiya məhlulundan 50 µl dörd quyudan üçünə əlavə edilmişdir. Dördüncü quyu MAMP xaric reaksiya məhlulunun əlavə edildiyi sınaq nəzarət quyusu idi. Hər boşqaba yalnız su olan dörd boş quyu da daxil edilmişdir.
Reaksiya məhlulu əlavə edildikdən sonra, lüminesans SynergyTM 2 çoxdəqiqəli mikroplitə oxuyucusu (BioTek) istifadə edərək 1 saat ərzində hər 2 dəqiqədən bir ölçüldü. Plitə oxuyucusu bu 1 saat ərzində hər 2 dəqiqədən bir lüminesans ölçmələri aparır. Hər quyu üçün dəyəri vermək üçün bütün 31 oxunuşun cəmi hesablanmışdır. Hər genotip üçün MAMP cavabının təxmini dəyəri (üç eksperimental quyunun orta lüminesans dəyəri - nümunə quyusu dəyəri) - orta boş quyu dəyəri çıxılmaqla hesablanmışdır. Boş quyu dəyərləri ardıcıl olaraq sıfıra yaxın idi.
Yarpaq diskləriNicotiana benthamiana, keyfiyyətə nəzarət məqsədləri üçün hər 96 quyulu lövhəyə nəzarət kimi bir yüksək həssaslıqlı sorghum xətti (SC0003) və bir aşağı həssaslıqlı sorghum xətti (PI 6069) da daxil edilmişdir.
B. cookeiinokulyasiyanın hazırlanması və inokulyasiya
B. cookeiinokulum əvvəllər təsvir edildiyi kimi hazırlanmışdır. Qısaca olaraq, sorghum dənələri üç gün suda isladılmış, yuyulmuş, 1 litrlik konusvari qablara yığılmış və 15 psi və 121 °C-də bir saat avtoklavda saxlanılmışdır. Daha sonra dənələrə təzə kulturadan təxminən 5 ml maserasiya olunmuş miselyum inokulyasiya edilmişdir.B. cookeiLSLP18 izolyatı alınır və otaq temperaturunda 2 həftə saxlanılır, hər 3 gündən bir kolbalar silkələnir. 2 həftədən sonra göbələklə yoluxmuş sorqum dənələri havada qurudulur və sonra tarla peyvəndinə qədər 4 °C-də saxlanılır. Bütün sınaq üçün eyni peyvənddən istifadə olunur və hər il təzə hazırlanır. Peyvənd üçün 4-5 həftəlik sorqum bitkilərinin içinə 6-10 yoluxmuş dənə yerləşdirilirdi. Bu göbələklərdən əmələ gələn sporlar bir həftə ərzində gənc sorqum bitkilərində infeksiyaya səbəb olurdu.
Toxum hazırlığı
Tarlada əkilməzdən əvvəl, sorqo toxumu təxminən 1% Spirato 480 FS funqisid, 4% Sebring 480 FS funqisid və 3% Sorpro 940 ES toxum qoruyucusu olan funqisid, insektisid və safener qarışığı ilə müalicə edildi. Daha sonra toxumlar 3 gün havada quruduldu ki, bu da toxumların ətrafında bu qarışığın nazik bir təbəqəsini təmin etdi. Safener, cücərmədən əvvəl müalicə kimi herbisid Dual Magnum-dan istifadə etməyə imkan verdi.
Hədəf Yarpaq Ləkəsinə qarşı müqavimətin qiymətləndirilməsi
SCP, 14-15 iyun 2017-ci il və 20 iyun 2018-ci il tarixlərində Şimali Karolina ştatının Kleyton şəhərindəki Mərkəzi Bitkilər Tədqiqat Stansiyasında təsadüfi seçilmiş tam blok dizaynında, hər bir halda iki eksperimental təkrarlama ilə əkilmişdir. Təcrübələr hər sahəyə 10 toxum istifadə edilərək 0,9 m sətir eni ilə 1,8 m tək cərgələrdə əkilmişdir. Kənar təsirlərin qarşısını almaq üçün hər təcrübənin perimetri ətrafında iki sərhəd cərgəsi əkilmişdir. Təcrübələr 20 iyul 2017-ci il və 20 iyul 2018-ci il tarixlərində peyvənd edilmişdir ki, bu zaman sorqo bitkiləri 3-cü böyümə mərhələsində idi. Reytinqlər birdən doqquza qədər şkala üzrə götürülmüşdür, burada xəstəlik əlamətləri göstərməyən bitkilər doqquz, tamamilə ölü bitkilər isə bir kimi qiymətləndirilmişdir. 2017-ci ildə iki qiymətləndirmə, 2018-ci ildə isə hər il peyvənddən iki həftə sonra başlayan dörd oxunuş aparılmışdır. sAUDPC (xəstəliyin irəliləmə əyrisi altında standartlaşdırılmış sahə) əvvəllər təsvir edildiyi kimi hesablanmışdır.
Yazı vaxtı: 01 aprel 2021