Bitki və patogen maddələr
Sorghum konversiya populyasiyası (SCP) kimi tanınan sorghum assosiasiyasının xəritəçəkmə əhalisi İllinoys Universitetində (indiki UC Davisdə) Dr. Pat Braun tərəfindən təqdim edilmişdir. Bu, əvvəllər təsvir edilmişdir və ABŞ mühitlərində bitkilərin böyüməsini və inkişafını asanlaşdırmaq üçün fotoperiod həssaslığına və daha kiçik boyuna çevrilmiş müxtəlif xətlərin toplusudur. Bu tədqiqatda bu populyasiyadan 510 xətt istifadə edilmişdir, baxmayaraq ki, pis cücərmə və digər keyfiyyətə nəzarət problemlərinə görə hər üç əlamətin təhlilində bütün xətlərdən istifadə edilməmişdir. Nəhayət, 345 sətirdən alınan məlumatlar xitin reaksiyasının təhlili üçün, 472 sətir flg22 cavabı və 456 sətir TLS müqaviməti üçün istifadə edilmişdir.B. CokeiLSLP18 ştammı Arkanzas Universitetində Dr. Burt Bluhmdan alınmışdır.
MAMP reaksiyasının ölçülməsi
Bu tədqiqatda iki fərqli MAMP istifadə edilmişdir flg22, (Genscript catalog# RP19986) və chitin . Sorgum bitkiləri istixanada torpaqla (33% Sunshine Redi-Earth Pro Artan Qarışıq) doldurulmuş mənzillərə qoyulmuş əlavələrdə yetişdirilmişdir. Nümunə toplanmasından bir gün əvvəl bitkilər suvarıldı ki, toplanma günü yarpaqlarda əlavə nəm qalmasın.
Xətlər təsadüfi seçildi və logistik səbəblərə görə 60 xəttdən ibarət dəstələrə əkildi. Hər sətir üçün, hər sətirdə iki toxum olan üç "qab" əkilmişdir. Sonrakı partiyalar əvvəlki partiya emal edildikdən sonra bütün əhali qiymətləndirilənə qədər əkilmişdir. Hər iki qaçışda genotiplər yenidən təsadüfiləşdirilmiş hər iki MAMP üçün iki eksperimental sınaq aparıldı.
ROS analizləri əvvəllər təsvir edildiyi kimi aparıldı. Qısaca desək, hər xətt üçün altı toxum 3 müxtəlif qaba əkilmişdir. Yaranan fidanlardan üçü vahidliyə əsaslanaraq seçildi. Qeyri-adi görünən və ya əksəriyyətindən əhəmiyyətli dərəcədə hündür və ya qısa olan şitillər istifadə edilmədi. Üç müxtəlif 15 günlük köhnə sorqo bitkisinin 4-cü yarpağının ən geniş hissəsindən 3 mm diametrli dörd yarpaq diski kəsilmişdir. İki bitkidən yarpaq başına bir disk və bir bitkidən iki disk, ikinci disk su nəzarətinə çevrilir (aşağıya bax). Disklər ayrı-ayrılıqda 50 µl H20 üzərində qara rəngli 96 quyu boşqabda üzdü, işığa məruz qalmamaq üçün alüminium möhürlə möhürləndi və gecə boyu otaq temperaturunda saxlanıldı. Ertəsi gün səhər reaksiya məhlulu 2 mq/ml kemilüminessent zond L-012 (Wako, kataloq # 120-04891), 2 mq/ml horseradish peroksidaz (Tip VI-A, Sigma-Aldrich, kataloq # P6782) və 100 mq/ml Xitin və ya 2 μM Flg22. Bu reaksiya məhlulundan 50 µl dörd quyudan üçünə əlavə edildi. Dördüncü quyu, MAMP istisna olmaqla, reaksiya məhlulunun əlavə edildiyi saxta nəzarət idi. Hər boşqabda yalnız su olan dörd boş quyu da var idi.
Reaksiya məhlulu əlavə edildikdən sonra, lüminesans SynergyTM 2 çox aşkarlayıcı mikroplitə oxuyucusu (BioTek) ilə hər 2 dəqiqədən bir 1 saat ərzində ölçüldü. Plitə oxuyucusu bu 1 saat ərzində hər 2 dəqiqədən bir lüminesans ölçmələri aparır. Hər bir quyu üçün qiymət vermək üçün bütün 31 oxunuşun cəmi hesablanmışdır. Hər bir genotip üçün MAMP cavabının təxmini dəyəri (üç eksperimental quyunun orta lüminesans dəyəri – saxta quyunun dəyəri) - orta boş quyu dəyərindən çıxılmaqla hesablanmışdır. Boş quyunun dəyərləri ardıcıl olaraq sıfıra yaxın idi.
yarpaq diskləriNikotiana benthamiana, keyfiyyətə nəzarət məqsədləri üçün hər 96 quyu boşqabına bir yüksək həssas sorqum xətti (SC0003) və bir aşağı həssas sorqo xətti (PI 6069) da nəzarət elementləri kimi daxil edilmişdir.
B. Cokeiinokulum hazırlanması və aşılanması
B. Cokeiinokulum əvvəllər təsvir edildiyi kimi hazırlanmışdır. Qısaca olaraq, sorqo taxılları üç gün suda isladılmış, yuyulmuş, 1 litrlik konusvari kolbalara tökülmüş və 15psi və 121 °C temperaturda bir saat avtoklavlanmışdır. Taxıllar daha sonra təzə kulturadan təxminən 5 ml maserasiya edilmiş miseliya ilə aşılandıB. CokeiLSLP18 təcrid olunur və hər 3 gündən bir kolbaları silkələməklə 2 həftə otaq temperaturunda saxlanılır. 2 həftədən sonra göbələklə yoluxmuş sorqo taxılları havada qurudulmuş və sonra tarlada peyvənd olunana qədər 4 °C temperaturda saxlanılmışdır. Eyni inokulum bütün sınaq üçün istifadə edilmiş və hər il təzə hazırlanmışdır. Peyvənd üçün 6-10 yoluxmuş taxıl 4-5 həftəlik sorqo bitkilərinin burulğanına yerləşdirildi. Bu göbələklərdən əmələ gələn sporlar bir həftə ərzində gənc sorqum bitkilərində infeksiyaya səbəb oldu.
Toxum hazırlığı
Tarlada əkilmədən əvvəl sorqo toxumu tərkibində ~ 1% Spirato 480 FS funqisidi, 4% Sebring 480 FS funqisidi, 3% Sorpro 940 ES toxum qoruyucusu olan funqisid, insektisid və qoruyucu qarışığı ilə müalicə olundu. Sonra toxumlar 3 gün havada qurudulur, bu da toxumların ətrafında bu qarışığın nazik bir örtüyü təmin edir. Təhlükəsizləşdirici herbisid Dual Magnum-un ortaya çıxmadan əvvəl müalicə kimi istifadəsinə icazə verdi.
Hədəf yarpaq ləkəsinə qarşı müqavimətin qiymətləndirilməsi
CQBK 14-15 iyun 2017-ci il və 20 iyun 2018-ci il tarixlərində Clayton, NC-də Mərkəzi Bitkiçilik Tədqiqat Stansiyasında hər bir halda iki eksperimental təkrarlama ilə təsadüfiləşdirilmiş tam blok dizaynında əkilmişdir. Təcrübələr 0,9 m sıra eni ilə 1,8 m tək cərgədə əkilmişdir, hər sahəyə 10 toxum istifadə edilmişdir. Kənar təsirlərin qarşısını almaq üçün hər təcrübənin periferiyasına iki sərhəd sırası əkilmişdir. Təcrübələr 20 iyul 2017-ci il və 20 iyul 2018-ci il tarixlərində peyvənd edildi, bu zaman sorqo bitkiləri 3-cü böyümə mərhələsində idi. Reytinqlər birdən doqquza qədər şkala üzrə götürüldü, burada xəstəlik əlamətləri göstərməyən bitkilər doqquz bal kimi qiymətləndirildi və tamamilə ölü bitkilər bir olaraq atıldı. 2017-ci ildə iki, 2018-ci ildə isə hər il aşılamadan iki həftə sonra dörd oxunuş aparıldı. sAUDPC (xəstəliyin irəliləmə əyrisi altında standartlaşdırılmış sahə) əvvəllər təsvir edildiyi kimi hesablanmışdır.
Göndərmə vaxtı: 01 aprel 2021-ci il