DELLA zülalları qorunub saxlanılırböyümə tənzimləyiciləridaxili və ətraf mühit siqnallarına cavab olaraq bitki inkişafına nəzarətdə mərkəzi rol oynayır. DELLA transkripsiya tənzimləyicisi kimi çıxış edir və GRAS domeni vasitəsilə transkripsiya faktorlarına (TF) və histon H2A-ya bağlanaraq hədəf promotorlar üçün işə götürülür. Son tədqiqatlar göstərdi ki, DELLA-nın stabilliyi iki mexanizm vasitəsilə post-translational olaraq tənzimlənir: fitohormon gibberellin tərəfindən induksiya olunan poliubiquitinasiya, onun sürətlə deqradasiyasına səbəb olur və onun yığılmasını artırmaq üçün kiçik ubiquitinə bənzər modifikatorların (SUMO) konjuqasiyası. Bundan əlavə, DELLA fəaliyyəti dinamik olaraq iki müxtəlif qlikosilasiya ilə tənzimlənir: DELLA-TF qarşılıqlı əlaqəsi O-fukosilasiya ilə gücləndirilir, lakin O ilə əlaqəli N-asetilqlükozamin (O-GlcNAc) modifikasiyası ilə inhibə edilir. Bununla belə, DELLA fosforlaşmasının rolu qeyri-müəyyən olaraq qalır, çünki əvvəlki tədqiqatlar fosforlaşmanın DELLA deqradasiyasını təşviq etdiyini və ya azaldığını göstərənlərdən tutmuş, fosforlaşmanın onun sabitliyinə təsir etmədiyini göstərən digər nəticələrə qədər ziddiyyətli nəticələr göstərmişdir. Burada biz REPRESSOR-da fosforlaşma yerlərini müəyyən edirikga1-3(RGA, AtDELLA) kütləvi spektrometriya analizi ilə Arabidopsis thaliana-dan təmizlənmiş və PolyS və PolyS/T bölgələrində iki RGA peptidinin fosforilləşməsinin H2A bağlanmasını və gücləndirilmiş RGA fəaliyyətini təşviq etdiyini göstərir. RGA-nın hədəf təşviqatçıları ilə birləşməsi. Xüsusilə, fosforlaşma RGA-TF qarşılıqlı təsirinə və ya RGA sabitliyinə təsir göstərmir. Tədqiqatımız fosforlaşmanın DELLA fəaliyyətini stimullaşdıran molekulyar mexanizmini ortaya qoyur.
DELLA funksiyasının tənzimlənməsində fosforlaşmanın rolunu aydınlaşdırmaq üçün in vivo DELLA fosforlaşma yerlərinin müəyyən edilməsi və bitkilərdə funksional analizlərin aparılması çox vacibdir. Bitki ekstraktlarının yaxınlıqdan təmizlənməsi və MS/MS analizi ilə RGA-da bir neçə fosfosit müəyyən etdik. GA çatışmazlığı şəraitində RHA fosforilasiyası artır, lakin fosforlaşma onun sabitliyinə təsir göstərmir. Əhəmiyyətli odur ki, co-IP və ChIP-qPCR analizləri RGA-nın PolyS/T bölgəsində fosforlaşmanın onun H2A ilə qarşılıqlı əlaqəsini və hədəf promotorlarla birləşməsini təşviq edərək, fosforlaşmanın RGA funksiyasını induksiya edən mexanizmini ortaya qoydu.
RGA, LHR1 subdomeninin TF ilə qarşılıqlı əlaqəsi vasitəsilə xromatini hədəfləmək üçün işə götürülür və sonra onun PolyS/T bölgəsi və PFYRE subdomeni vasitəsilə H2A ilə birləşərək RGA-nı sabitləşdirmək üçün H2A-RGA-TF kompleksini əmələ gətirir. DELLA domeni ilə GRAS domeni arasında PolyS/T bölgəsində Pep 2-nin naməlum kinaz tərəfindən fosforilasiyası RGA-H2A bağlanmasını gücləndirir. Rgam2A mutant zülalı RGA fosforilasiyasını ləğv edir və H2A bağlanmasına mane olmaq üçün fərqli zülal konformasiyasını qəbul edir. Bu, keçici TF-rgam2A qarşılıqlı təsirlərinin qeyri-sabitləşməsi və rgam2A-nın hədəf xromatindən dissosiasiyası ilə nəticələnir. Bu rəqəm yalnız RGA vasitəçiliyi ilə transkripsiya repressiyasını təsvir edir. H2A-RGA-TF kompleksinin hədəf gen transkripsiyasını təşviq edəcəyi və rgam2A-nın defosforilasiyası transkripsiyanı azaldacağı istisna olmaqla, RGA vasitəçiliyi ilə transkripsiya aktivləşdirilməsi üçün oxşar nümunə təsvir edilə bilər. Huang et al.21-dən dəyişdirilmiş rəqəm.
Bütün kəmiyyət məlumatları Excel-dən istifadə etməklə statistik olaraq təhlil edildi və əhəmiyyətli fərqlər Student's t testindən istifadə edilərək müəyyən edildi. Seçmənin ölçüsünü ilkin olaraq müəyyən etmək üçün heç bir statistik metoddan istifadə edilməmişdir. Təhlildən heç bir məlumat çıxarılmadı; təcrübə təsadüfi deyil; tədqiqatçılar eksperiment zamanı məlumatların paylanmasına və nəticələrin qiymətləndirilməsinə göz yummadılar. Nümunə ölçüsü rəqəmin əfsanəsində və mənbə məlumat faylında göstərilmişdir.
Tədqiqat dizaynı haqqında daha çox məlumat üçün bu məqalə ilə əlaqəli Təbii Portfolio Hesabat Abstraktına baxın.
Kütləvi spektrometriya proteomikası məlumatları PXD046004 verilənlər bazası identifikatoru ilə PRIDE66 tərəfdaş anbarı vasitəsilə ProteomeXchange konsorsiumuna təqdim edilmişdir. Bu tədqiqat zamanı əldə edilən bütün digər məlumatlar Əlavə Məlumat, Əlavə Məlumat Faylları və Xam Məlumat Fayllarında təqdim olunur. Bu məqalə üçün mənbə məlumatları təqdim olunur.
Göndərmə vaxtı: 08 noyabr 2024-cü il