DELLA zülalları qorunub saxlanılan ustadırböyümə tənzimləyiciləridaxili və ətraf mühit siqnallarına cavab olaraq bitki inkişafının idarə olunmasında mərkəzi rol oynayan DELLA transkripsiya tənzimləyicisi kimi çıxış edir və GRAS domeni vasitəsilə transkripsiya amillərinə (TF) və histon H2A-ya bağlanaraq promotorları hədəf almaq üçün cəlb olunur. Son tədqiqatlar göstərir ki, DELLA sabitliyi iki mexanizm vasitəsilə translyasiya sonrası tənzimlənir: fitohormon gibberellin tərəfindən induksiya edilən poliubiquitinləşmə, onun sürətli parçalanmasına səbəb olur və onun yığılmasını artırmaq üçün kiçik ubiquitin bənzəri modifikatorların (SUMO) konjugasiyası. Bundan əlavə, DELLA aktivliyi iki fərqli qlikozilləşmə ilə dinamik şəkildə tənzimlənir: DELLA-TF qarşılıqlı təsiri O-fukozilləşmə ilə artır, lakin O ilə əlaqəli N-asetilglükozamin (O-GlcNAc) modifikasiyası ilə inhibə edilir. Lakin, əvvəlki tədqiqatlar fosforilləşmənin DELL-nin parçalanmasını təşviq etdiyini və ya azaltdığını göstərənlərdən fosforilləşmənin onun sabitliyinə təsir etmədiyini göstərən digərlərinə qədər ziddiyyətli nəticələr göstərdiyindən, DELLA fosforilləşmə yerlərini müəyyən edirik. Burada biz REPRESSOR-da fosforilləşmə sahələrini müəyyən edirik.ga1-3(RGA, AtDELLA) kütlə spektrometriyası təhlili ilə Arabidopsis thaliana-dan təmizlənmiş və PolyS və PolyS/T bölgələrində iki RGA peptidinin fosforlaşmasının H2A bağlanmasını və RGA aktivliyini artırdığını göstərir. RGA-nın hədəf promotorlarla əlaqəsi. Xüsusilə, fosforlaşma RGA-TF qarşılıqlı təsirlərinə və ya RGA sabitliyinə təsir göstərmir. Tədqiqatımız fosforlaşmanın DELLA aktivliyini necə induksiya etdiyini göstərən molekulyar mexanizmi ortaya qoyur.
Fosforlaşmanın DELLA funksiyasının tənzimlənməsindəki rolunu aydınlaşdırmaq üçün DELLA fosforlaşma sahələrini in vivo olaraq müəyyən etmək və bitkilərdə funksional analizlər aparmaq vacibdir. Bitki ekstraktlarının affinlik təmizlənməsi və ardınca MS/MS analizi ilə RGA-da bir neçə fosfosit müəyyən etdik. GA çatışmazlığı şəraitində RHA fosforlaşması artır, lakin fosforlaşma onun sabitliyinə təsir etmir. Əhəmiyyətli olan odur ki, co-IP və ChIP-qPCR analizləri RGA-nın PolyS/T bölgəsində fosforlaşmanın onun H2A ilə qarşılıqlı təsirini və hədəf promotorlarla əlaqəsini təşviq etdiyini və fosforlaşmanın RGA funksiyasını necə induksiya etdiyini ortaya qoyduğunu göstərdi.
RGA, LHR1 alt domeninin TF ilə qarşılıqlı təsiri vasitəsilə xromatini hədəf almaq üçün cəlb olunur və sonra PolyS/T bölgəsi və PFYRE alt domeni vasitəsilə H2A-ya bağlanır və RGA-nı sabitləşdirmək üçün H2A-RGA-TF kompleksini əmələ gətirir. DELLA domeni ilə GRAS domeni arasındakı PolyS/T bölgəsində Pep 2-nin naməlum kinaz tərəfindən fosforlaşması RGA-H2A bağlanmasını artırır. rgam2A mutant zülalı RGA fosforlaşmasını ləğv edir və H2A bağlanmasına müdaxilə etmək üçün fərqli bir zülal konformasiyası qəbul edir. Bu, keçici TF-rgatam2A qarşılıqlı təsirlərinin qeyri-sabitləşməsinə və rgatam2A-nın hədəf xromatindən ayrılmasına səbəb olur. Bu şəkildə yalnız RGA vasitəçiliyi ilə transkripsiya repressiyası təsvir edilmişdir. RGA vasitəçiliyi ilə transkripsiya aktivləşməsi üçün oxşar bir nümunə təsvir edilə bilər, lakin H2A-RGA-TF kompleksi hədəf gen transkripsiyasını təşviq edəcək və rgatam2A-nın defosforlaşması transkripsiyanı azaldacaq. Şəkil Huang və digərlərindən dəyişdirilmişdir.21.
Bütün kəmiyyət məlumatları Excel proqramından istifadə edərək statistik olaraq təhlil edilmiş və əhəmiyyətli fərqlər Student t testindən istifadə edərək müəyyən edilmişdir. Nümunə ölçüsünü əvvəlcədən müəyyən etmək üçün heç bir statistik metoddan istifadə edilməmişdir. Təhlildən heç bir məlumat çıxarılmamışdır; təcrübə təsadüfi seçilməmişdir; tədqiqatçılar təcrübə zamanı məlumatların paylanmasına və nəticələrin qiymətləndirilməsinə göz yumulmamışlar. Nümunə ölçüsü şəkil əfsanəsində və mənbə məlumat faylında göstərilmişdir.
Tədqiqat dizaynı haqqında daha çox məlumat üçün bu məqalə ilə əlaqəli Təbii Portfel Hesabatının Xülasəsinə baxın.
Kütlə spektrometriyası proteomikası məlumatları PXD046004 məlumat dəsti identifikatoru olan PRIDE66 tərəfdaş deposu vasitəsilə ProteomeXchange konsorsiumuna təqdim edilmişdir. Bu tədqiqat zamanı əldə edilən bütün digər məlumatlar Əlavə Məlumatlarda, Əlavə Məlumat Fayllarında və Xam Məlumat Fayllarında təqdim olunur. Mənbə məlumatları bu məqalə üçün təqdim olunur.
Yazı vaxtı: 08 Noyabr 2024